测序文库“瘦身”记：揭秘片段筛选如何让DNA“排队”上机？
二代测序
二代测序（NGS）是一种DNA测序技术，通过对多个小DNA片段进行平行测序来确定基因序列。而文库构建就是将DNA或RNA样本“加工”成适合测序仪读取的标准化文库。简单来说，就像把一本厚重的书拆成碎片，再贴上统一的“条形码”和“页码”，方便机器高效识别。
建库关键步骤
与一代和三代测序不同，二代测序仪对文库片段的长度有严格要求（如Illumina平台常用300-500bp）。若片段过长，测序读长无法覆盖；若过短，可能导致数据冗余或接头污染。此外，片段均一性直接影响测序数据的质量和后续分析的准确性。就像快递分拣，只有大小合适的包裹才能高效通过传送带，避免卡机或丢失。所以建库实验中，片段筛选的准确性尤为重要。
片段筛选的步骤
在建库实验中，一般是对接头连接产物或者扩增产物进行片段筛选。对接头连接产物进行筛选，可以在扩增前最大限度的去除不合格片段，提高扩增效率；对扩增产物进行筛选，是对最终文库产物进行双选，最大限度的保证文库片段一致性，无论是哪种方式，都能实现文库片段的严格把控。片段筛选的步骤一般包括：
1.磁珠纯化：
收集全部产物，去除反应体系中多余的酶、引物等杂质；
2.双步分选：
第一步去大片段：加入一定比例磁珠，吸附大片段DNA，保留上清中的目标小片段；
第二步去小片段：加入不同比例磁珠，吸附目标片段，去除过小的杂质（如接头二聚体）；
3.洗脱收集：
将吸附在磁珠上的目标片段洗脱下来，用于下一步实验。
随着二代测序应用越来越广泛，实验员在进行分选实验操作时的痛点也越来越明显：
步骤繁琐：需多次调整磁珠浓度，纯化步骤易出错；
样本损失：手工操作可能导致珍贵样本损耗（尤其微量样本）；
时间成本高：单次实验耗时2小时以上，批量处理效率低；
均一性依赖经验：分选效果受操作手法影响大，新手易翻车；
睿科NGS自动化文库构建工作站应运而生，解放双手，实现高通量、高质量、低损耗、标准化的文库构建。
睿科NGS系列自动化建库仪
精准加样
8通道移液头，兼具单通道功能，可实现1-250μL范围的精准移液，高效完成试剂添加、样本混匀、样本转移、移除废液等操作。
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自动化程度高
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安全可靠
积累多个厂家建库流程的测试（诺唯赞、华大、KAPA、illumina、Pacbio、Nanopore），建库结果稳定有保证；配备紫外杀毒、选配负压过滤装置，保障实验人员安全。
片段筛选虽是小步骤，却是文库质量的“守门员”。随着自动化技术的普及，科研人终于可以从重复劳动中解放，专注更有价值的科学问题！如果你还在手动分选DNA片段，不妨试试睿科NGS自动化文库构建工作站，让实验效率飞起来～